Citometría de flujo

El servicio de citometría de flujo está equipado con un analizador EPICS, Coulter con un láser de argón sintonizado a 488 nm capaz de procesar seis señales simultáneas: dos de dispersión y cuatro de fluorescencia en el rango de 525 a 675 nm y un separador modelo FACS Vantage, Becton Dickinson, equipado con un láser de argón (emisión a 360 y 488 nm simultáneamente) y un láser de He-Ne con emisión a 635 nm, con capacidad para procesar siete señales simultáneas: dos de dispersión y cinco de fluorescencia en el rango 424 a 670 nm. Este servicio es utilizado de forma rutinaria por 30 grupos de trabajo. Algunas de las aplicaciones que se llevan a cabo son:

Serotipaje y detección mediante inmunofluorescencia de antígenos en células eucariotas. Identificación de genes reporteros mediante inmunofluorescencia

Caracterización de mutantes de levaduras de ciclo celular y de función, asociados a cambios de potencial de membrana plasmática y/o mitocondrial.

Ensayos de viabilidad celular mediante medidas de dispersión, captación de fluorocromos tipo aniónico (oxonoles), y catiónicos (cianinas).

Evaluación de los cambios en el potencial de membrana plasmática, como medida de la toxicidad de compuestos (péptidos, etc. ) con actividad citotóxica.

Fenotipaje celular con fluorocromos.

Análisis del ciclo celular (Ioduro de Propidio, Hoechst..etc.). Apoptosis y necrosis. Monitorización del ciclo celular mediante marcaje con BrdU. Análisis estructural de la cromatina con fluorocromos de efecto metacromático (Naranja de Acridina).

Caracterización de vías de señalización en dobles transfectantes mediante trazadores tipo GFP, BFP (green, blue fluorescent proteins).

Determinación de asociaciones moleculares mediante ensayos de transferencia de radiación entre fluorocromos.

Producción de metabolitos del oxígeno (superóxido, peróxido y óxido nítrico).

Cambios de pH intracelular y flujos de Ca2+ con fluorocromos de excitación en el espectro visible.